Ca++Pure-HA是一種由鈣和磷酸鹽組成的、用于分離生物分子的羥基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2]?層析介質(zhì)。Ca++Pure-HA顆粒，包括配基和填料骨架，都是由同一種材料來(lái)源同時(shí)形成，為工藝開(kāi)發(fā)提供了無(wú)與倫比的選擇性和分辨率。其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。
? ? 羥基磷灰石（HA）是目前最具有特征的混合模式填料之一，在整個(gè)生物分離領(lǐng)域，具有重要的研究和工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。該填料兼具離子交換和金屬親和力，具有其他填料不具備的特殊分離能力，能夠?yàn)樯锓蛛x領(lǐng)域的新興挑戰(zhàn)提供獨(dú)特的解決方案。 Ca++Pure-HA尤其適用于純化單克隆和多克隆抗體，分離抗體的多種亞型、同工酶，純化抗體片段，以及從雙鏈DNA中分離單鏈DNA。
Ca++Pure-HA層析介質(zhì)是大孔徑的球型羥基磷灰石六方晶體結(jié)構(gòu)（圖1）。經(jīng)過(guò)高溫?zé)Y(jié)，提高了機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性，能夠滿(mǎn)足工業(yè)規(guī)模的應(yīng)用要求。Ca++Pure-HA的強(qiáng)大特性使其可在高流速和大型層析柱中重復(fù)循環(huán)使用。
圖1 Ca++Pure-HA的晶體結(jié)構(gòu)
圖2 ?Ca++Pure-HA 顆粒顯微鏡照片
產(chǎn)品參數(shù)
骨架 | 羥基磷灰石 Ca10(PO4)6(OH)2 |
平均粒徑 | 39μm |
動(dòng)態(tài)吸附載量 | ＞30g/L 人源化IgG（2min柱留時(shí)間） |
＞25g/L 溶菌酶（2min柱留時(shí)間） | |
壓力范圍 | 10 MPa（max） |
珠密度 | ≥0.5g/ml |
耐堿性 | ＞65CIP cycle in 1.0mol/L NaOH |
出貨狀態(tài) | 干粉 |
pH 范圍 | 6.5-14.0 |
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工作原理
1.?與鈣基團(tuán)的相互作用
※?位于表面的鈣基團(tuán)帶正電荷
※?Ca++Pure-HA 鈣基團(tuán)的工作原理類(lèi)似于陰離子交換
2.?與磷酸基團(tuán)的相互作用
※?Ca++Pure-HA的磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷
※?與磺酸基和羧基等陽(yáng)離子交換介質(zhì)一樣，Ca++Pure-HA的磷酸基團(tuán)通過(guò)與帶正電荷的氨基殘基通過(guò)靜電相互作用結(jié)合強(qiáng)堿性物質(zhì)
3.?與羥基的相互作用
※?羥基具有形成氫鍵的能力，但是這一途徑尚未被證明對(duì)生物分子的保留有顯著的貢獻(xiàn)。羥基的含量遠(yuǎn)低于磷酸基，因此即使參與氫鍵，也可能比磷酸氧介導(dǎo)的氫鍵貢獻(xiàn)更少的結(jié)合能力。
4.?混合模式相互作用
※?混合模式同時(shí)也解釋了 Ca++Pure-HA 如何在離子交換作用無(wú)法提供的條件下，依然能夠發(fā)揮卓越的結(jié)合能力。大多數(shù)抗體會(huì)結(jié)合陽(yáng)離子交換填料，但需要在低 pH 值和低電導(dǎo)率的條件下進(jìn)行結(jié)合。Ca++Pure-HA 在中性pH值下具有良好的載量，有時(shí)甚至是在生理電導(dǎo)率下也具有良好的載量。這是 Ca++Pure-HA表面化學(xué)物質(zhì)之間協(xié)同作用的一個(gè)很好例證。金屬親和作用克服了陽(yáng)離子交換的弱點(diǎn)，而且兩種弱相互作用共同產(chǎn)生了足夠的結(jié)合能，非常具有實(shí)用價(jià)值。
圖3?Ca++Pure-HA的動(dòng)態(tài)吸附載量
? ? 如圖3所示，Ca++Pure-HA具有很高的動(dòng)態(tài)吸附載量（DBC）。在5%的穿透率下，駐留時(shí)間為4分鐘時(shí)，對(duì)人IgG的DBC大于40g/L。
圖4?使用?Ca++Pure-HA精純IgG樣品（來(lái)自Protein A純化后收集的組分）
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Ca++Pure-HA使用氯化物等洗脫緩沖溶液可有效去除mAb中的聚集體和降解物，如圖4所示。分析結(jié)果顯示單體峰和聚集體峰之間具有較高分辨率。
圖?5?使用Ca++Pure-HA純化前后IgG樣品的SEC分析
圖5顯示的是在Ca++Pure-HA上純化前后的SEC分析譜圖，聚集體和降解物明顯減少。HPLC分析的數(shù)據(jù)匯總?cè)绫?/span>1所示。
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條件 | 填料 | 樣品組分（ml） | 聚集體（%） | 片段（%） |
初始進(jìn)樣量 | 18.8 | 1.3 | ||
KCl溶液洗脫 | Ca++Pure-HA | 8.9 | 1.1 | 1.0 |
表1 使用Ca++Pure-HA及KCl洗脫緩沖溶液減少的IgG聚集體和片段
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Ca++Pure-HA在0.5mol/L NaOH中具有良好的耐堿性，即使超過(guò)65個(gè)CIP循環(huán)后，其動(dòng)態(tài)吸附載量也沒(méi)有明顯降低（圖6）。圖中為使用1.0 mol/L NaOH，每經(jīng)過(guò)5個(gè)CIP循環(huán)后測(cè)得的溶菌酶的動(dòng)態(tài)吸附載量。
圖6?Ca++Pure-HA的耐堿性
Ca++Pure-HA層析介質(zhì)具有卓越的分離特性以及無(wú)與倫比的選擇性和分辨率，可以在捕獲階段到最終精純的任何步驟中靈活應(yīng)用，為純化工作者在分離生物分子時(shí)提供了更好的選擇。
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訂貨信息
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貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
45045 | Ca++Pure-HA，50g |
45039 | Ca++Pure-HA，100g |
45040 | Ca++Pure-HA，250g |
45041 | Ca++Pure-HA，500g |
45042 | Ca++Pure-HA，1kg |
45043 | Ca++Pure-HA，5kg |
