一、?產(chǎn)品簡(jiǎn)介
? ? ? ?QuikSep LH-20是在葡聚糖凝膠G-25的基礎(chǔ)上用羥丙基修飾而成的，引入羥丙基后使得該介質(zhì)同時(shí)具備親水性和親脂性，可以使用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相，適合于中藥有效成分的分離純化以及抗生素和化學(xué)藥物的精細(xì)純化。分離原理結(jié)合了凝膠過濾、分配層析、吸附層析的特點(diǎn)，能分離結(jié)構(gòu)非常接近的分子。
二、?QuikSep LH-20技術(shù)參數(shù)
顆粒大?。ǜ桑?/span> | 40~120μm |
平均顆粒大小（干）+ | 80μm |
平均顆粒大?。瘢?/span> | 在不同溶液中的差別大 |
最大流速（cm/h） | 和壓力成正比 |
排阻極限++ | 4kd（線性分子），5kd（球狀分子） |
外觀 | 白色或者灰白色粉狀固體 |
耐壓 | 0.3MPa |
pH穩(wěn)定性 | 2~13 |
注：+顆粒大小呈正態(tài)分布，在該范圍內(nèi)的顆粒占總數(shù)的85%以上
? ? ? ?++不同溶液中會(huì)有差異，本數(shù)據(jù)為在PBS 中顆粒大小
QuikSep LH-20在不同溶劑中溶脹比列表
溶劑 | 溶脹比 | 溶劑 | 溶脹比 |
二甲基亞砜 | 4.4~4.6 | 丙醇 | 3.7~4.0 |
吡啶 | 4.2~4.4 | 乙醇 | 3.6~3.9 |
水 | 4.0~4.4 | 異丁醇 | 3.6~3.9 |
二甲基甲酰胺 | 4.0~4.4 | 建酰胺 | 3.6~3.9 |
甲醇 | 3.9~4.3 | 二氯甲烷 | 3.6~3.9 |
二氯乙烯 | 3.8~4.1 | 丁醇 | 3.5~3.8 |
氯仿 | 3.8~4.1 | 異丙醇 | 3.3~3.6 |
四氫呋喃 | 3.3~3.6 | 丙酮 | 2.4~2.6 |
乙腈 | 2.2~2.4 |
注：溶脹比為每克干粉溶脹后的體積（ml）。
三、使用方法
由于介質(zhì)是以干粉的方式提供的，所以需要先溶脹，然后裝填層析柱后使用。
3.1 溶脹
● 根據(jù)層析柱的體積計(jì)算需要的QuikSep LH-20干粉的量
?? 干粉的量（g）=（柱體積×1.15）÷溶脹比
●? 將介質(zhì)倒入5倍干粉重量的相應(yīng)溶劑中并稍作攪拌，溶脹一般需要4h 以上（注意在溶脹過程中不要使用磁力攪拌子攪拌，使用磁力攪拌子會(huì)導(dǎo)致介質(zhì)顆粒破裂），常溫溶脹后最好在負(fù)壓下脫氣。
● 溶脹完成后（高溫溶脹需等到冷卻到室溫），去掉部分上層清液，使沉降膠的體積占總體積的50%~75%，攪勻備用。
3.2 裝柱
注意：由于QuikSep LH-20經(jīng)常在有機(jī)溶劑下使用，請(qǐng)確保您所使用的層析柱能耐受相應(yīng)的有機(jī)溶劑。高濃度的有機(jī)溶劑會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室型柱子外殼破裂，在裝柱過程中注意不要讓有機(jī)溶劑接觸到實(shí)驗(yàn)室型柱子外殼。在使用二氯甲烷或者三氯甲烷裝柱的時(shí)候，介質(zhì)會(huì)浮在液體表面，可以采用雙柱頭從下向上裝柱。
●? 采用與溶脹液一致的液體作為裝柱緩沖液。
● 取清洗干凈的層析柱，排凈柱底膜氣泡，并在柱子底部保留1cm高左右的液柱，調(diào)整柱子使其垂直于地面。
● 將攪勻后的膠懸液一次緩慢倒入層析柱內(nèi)，注意不要帶入氣泡，倒入后用塑料棒再次攪勻。
● 將上柱頭連接到層析系統(tǒng)或者蠕動(dòng)泵，排凈上柱頭篩網(wǎng)下面的氣泡，將柱頭放入層析柱內(nèi)，旋緊密封旋鈕。
● 設(shè)定裝柱流速，由于QuikSep LH-20凝膠硬度比較大，流速和壓力幾乎成正比，在3bar 以內(nèi)的壓力下不會(huì)對(duì)介質(zhì)造成破壞，應(yīng)以盡可能大的流速完成裝柱。
● 打開柱子下端封頭，按照上面設(shè)定的流速啟動(dòng)蠕動(dòng)泵或者層析系統(tǒng)。設(shè)定柱內(nèi)壓力小于層析柱最大耐壓，若在裝柱過程中超壓，需要適當(dāng)降低流速。
● 待膠懸液沉降完成需要再保持30min 以上，標(biāo)記膠面的位置，然后停泵。
● 去掉裝柱器（如果有的話），將柱頭下降至膠面上約0.5cm 的位置，按照上面的流速繼續(xù)壓膠一次，標(biāo)記膠面的位置。
● 停泵，稍微放松柱頭密封圈，確保柱頭上的閥門是關(guān)閉的，柱底的閥門是打開的，下壓膠面至標(biāo)記位置下面5mm，旋緊柱頭密封圈，關(guān)閉底部閥門，裝柱完成。
3.3 柱效評(píng)價(jià)
柱效測(cè)定可以采用丙酮作為指示劑或者NaCl 作為指示劑，按照下表配制指示劑溶液和流動(dòng)相。
丙酮法測(cè)柱效 | NaCl法測(cè)柱效 | |
樣品 | 1.0%（v/v）丙酮水溶液 | 2M ? NaCl（溶于水） |
樣品體積 | 1.0%柱體積 | 1.0%柱體積 |
流動(dòng)相 | 水 | 0.4M ? NaCl |
流速 | 30cm/h | 30cm/h |
檢測(cè)器 | UV ? 280nm | 電導(dǎo)率 |
計(jì)算柱效：
根據(jù)UV或者電導(dǎo)率曲線計(jì)算理論塔板高度（HETP）、理論塔板數(shù)（N）和非對(duì)稱因子（As），公式如下：
HETP=L/N
N=5.54(VR/Wh)2
其中：VR=保留體積
Wh=半高峰寬
L=柱高
N=理論塔板數(shù)
VR和Wh的單位應(yīng)一致；
As=b/a
其中：
a= 在10%峰高處的第一個(gè)半峰寬
b= 在10%峰高處的第二個(gè)半峰寬
結(jié)果評(píng)價(jià)：
由以上公式計(jì)算出的HETP 的數(shù)值若大于三倍溶脹后的介質(zhì)平均顆粒大小且非對(duì)稱因子在0.8~1.8 則判定為合格。對(duì)于不理想的柱效需要分析原因并重新裝柱。
3.4 層析方法
● 緩沖液選擇：QuikSep LH-20 可以在各種水相或者有機(jī)相中運(yùn)行，根據(jù)被分離物種的性質(zhì)和分配層析的原理選擇流動(dòng)相，常選用乙酸乙酯、甲醇、水三種物質(zhì)的混合溶液，根據(jù)目的物的出峰時(shí)間調(diào)整流動(dòng)相中各物質(zhì)的比例。
● 流速：以柱高80cm 為例，一般推薦的流速約為30~90cm/h，柱高越大流速越慢。
● 樣品及上樣量：為防止樣品堵塞柱子，在上樣前樣品需要用0.45μm 的微孔濾膜過濾，若目的物和雜質(zhì)差別比較小，上樣體積通常按照柱體積的1%~5%上樣。
四、分離效果的影響因素
QuikSep LH-20凝膠介質(zhì)分離效果受多種原理影響，
●? 凝膠過濾，若目的物和介質(zhì)沒有相互作用則依據(jù)分子篩的原理進(jìn)行分離，緩沖液的選擇主要考慮目的物的可溶性，影響因素參考凝膠過濾的影響因素。著重考慮柱效、流速、上樣量等因素
●? 分配色譜，根據(jù)相似相容的原理，通過調(diào)整流動(dòng)相的極性，使目的物在流動(dòng)相和固定相中合理分配。
●? 吸附作用，交聯(lián)劑中含有的少量醚氧基以及羥丙基可以通過疏水的作用結(jié)合生物分子，羥丙基的羥基可以通過氫鍵的作用結(jié)合生物分子，如果發(fā)生了結(jié)合可以從以上兩個(gè)方面考慮，并采用相應(yīng)的措施。
五、清洗與再生
QuikSep LH-20凝膠介質(zhì)在使用一段時(shí)間后有可能柱效下降，分離效果變差，可采用下面的流程進(jìn)行清洗和再生。
● 用蒸餾水沖洗2 個(gè)柱體積
● 用1M NaCl 沖洗1 個(gè)柱體積
● 用0.2M NaOH 沖洗1 個(gè)柱體積
● 用蒸餾水沖洗4 個(gè)柱體積
六、滅菌
溶脹后的QuikSep LH-20 可以使用121℃高壓滅菌30min，或者采用0.5M NaOH 處理30min 達(dá)到滅菌的目的。
七、儲(chǔ)存
干粉QuikSep LH-20 在陰涼干燥處密閉存放，防止吸潮；溶脹后的QuikSep LH-20 儲(chǔ)存于20%乙醇中，為了防止乙醇揮發(fā)以及微生物生長(zhǎng)，建議3個(gè)月更換一次新鮮的20%乙醇，保存在4~8℃環(huán)境中的效果更好。
八、銷毀與回收
由于QuikSep LH-20 系列介質(zhì)在自然界很難降解，為了保護(hù)環(huán)境建議采用焚燒處理。
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 包裝 |
QuikSep LH-20 | QS121305 | 25g |
QS121307 | 100g | |
QS121311 | 500g | |
QS121312 | 1kg | |
QS121313 | 5kg |
